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目前荔枝AV污在线观看標記及修飾的內容非常多,廣泛應用在荔枝AV污在线观看藥物,荔枝AV污在线观看生物學,荔枝AV污在线观看抗體以及荔枝AV污在线观看試劑的研究中。目前應用廣泛的有:非放射性核素標記(C13,H2,N15),熒光標記(FAM,FITC等),生物素標記,磷酸化修飾等。
1. 非放射性核素標記
目前在非放射性核素標記中,使用廣泛的仍然是C13,H2,因為其使用安全,放射性小。現在有比較完全的非放射性標記的荔枝视频黄下载,可以按照正常的荔枝AV污在线观看合成方法將標記好的荔枝视频黄下载直接連接到荔枝AV污在线观看上。
2. 熒光標記
熒光標記由於沒有放射性,實驗操作簡單。因此,目前在生物學研究中熒光標記應用非常廣泛,熒光標記方法與熒光試劑的結構有關係,對於有遊離羧基的采用的方法與接肽反應相同,也采用HBTU/HOBt/DIEA方法連接。 在N端標記FITC的荔枝AV污在线观看需經曆環化作用來形成熒光素,通常會伴有最後一個荔枝视频黄下载的去除,但當有一個間隔器如氨基己酸,或者是通過非酸性環境將目的肽從樹脂上切下來時,這種情況可避免。
3. 生物素標記
生物素-親合素係統 (biotin-avidin system,BAS),是70年代後期應用於免疫學,並得到迅速發展的一種新型生物反應放大係統。由於它具有生物素與親合素之間高度親和力及多級放大效應,並與熒光素、酶、同位素等免疫標記技術有機地結合,使各種示蹤免疫分析的特異性和靈敏度進一步提高。主要有用於標記荔枝AV污在线观看氨基的生物素N-羥基丁二酰亞胺酯(BNHS)和生物素對硝基酚酯(pBNP),其中以BNHS最常用,當然,也可以直接使用生物素也可以標記,因為其結構上有個遊離的羧基,采用HBTU/HOBt/DIEA方法縮合,由於生物素的溶解度低,使用DMSO/DMF的混合溶劑增加溶解度。
4. 磷酸肽合成
磷酸肽在生命過程中發揮重要作用,磷酸化的位置在荔枝AV污在线观看上的Ser,Thr,Tyr。目前磷酸肽合成一般都采用磷酸化荔枝视频黄下载,目前使用的都是單苄基磷酸化荔枝视频黄下载。磷酸化荔枝视频黄下载的連接一般采用HBTU/HOBt/DIEA方法,但是目前采用該方法合成磷酸化也有缺點,特別是在合成多磷酸化荔枝AV污在线观看或長肽的時候,連接效率低,最後產品純度很低,對於這種磷酸化荔枝AV污在线观看,荔枝AV污在线观看考慮采用後磷酸化方法,其合成過程就是在荔枝AV污在线观看合成結束後,選擇性脫去要標記的荔枝视频黄下载的側鏈保護基,對於Tyr,Thr可以直接使用側鏈不保護的荔枝视频黄下载進行反應,而Ser可以采用Fmoc-Ser(trt),在1% TFA/DCM條件下可以定量的脫除。後磷酸化,采用雙苄基亞磷酰胺,四氮唑生成亞磷酰胺四唑活性中間體,連接到羥基上,隨後在過氧酸下氧化生成磷酰基,完成反應。